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    分子生物學實驗室設計

    分子生物學實驗室主要應用于大專院校教學,科研機構和醫療衛生機構的相關科學研究。

    分子生物學實驗室設計
    在進行植物組織培養工作之前,首先應對工作中需要哪些最基本的設備條件有個全面的了解,以便因地制宜地利用現有房屋,或新建、改建實驗室。實驗室的大小取決于工作的目的和規模。以工廠化生產為目的,實驗室規模太小,則會限制生產,影響效率。

    在設計實驗室時,應按組織培養程序來沒計,避免某些環節倒排,引起日后工作混亂。植物組織培養是在嚴格無菌的條件下進行的。要做到無菌的條件,需要一定的設備、器材和用具,同時還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養條件。

    實驗室設計原則:保證無菌操作,達到工作方便,防止污染。
    實驗室組成:化學實驗室、洗滌菌室、無菌操作室(接種室)、培養室、細胞學實驗室、其他小型儀器設備。
    1) 化學實驗室(準備室):完成所使用的各種藥品的貯備、稱量、溶解、配制、培養基分裝等。
    主要設備:藥品柜、防塵櫥(放置培養容器)、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計及常用的培養基配制用玻璃儀器.
    2) 洗滌、滅菌室:完成各種器具的洗滌、干燥、保存、培養基的滅菌等。
    主要設備:水池、操作臺、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器(如烘箱)等。
    3) 無菌操作室(接種室):主要用于植物材料的消毒、接種、培養物的轉移、試管苗的繼代、原生質體的制備以及一切需要進行無菌操作的技術程序。
    主要設備:紫外光源、超凈工作臺、消毒器、酒精燈、接種器械(接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針)等。
    接種室宜小不宜大,一般7~8平米,要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑,易于清潔和消毒。配置拉動門,以減少開關門時的空氣擾動。接種室要求干爽安靜,清潔明亮。在適當位置吊裝1~2盞紫外線滅菌燈,用以照射滅菌。最好安裝一小型空調,使室溫可控,這樣可使門窗緊閉,減少與外界空氣對流。接種室應設有緩沖問,面積1m2為宜。進入無菌操作室前在此更衣換鞋,以減少進出時帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外線滅菌燈,用以照射滅菌。
    4) 培養室:培養室是將接種的材料進行培養生長的場所。培養室的大小可根據需要培養架的大小、數目、及其他附屬設備而定。其設計以充分利用空間和節省能源為原則。
    分子生物學實驗室設計
    分子生物學實驗室PCR
    PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。
    1.試劑貯存和準備區:該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求。
    2.標本制備區:該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。 本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。
    3. 擴增反應混合物配制和擴增區:該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開反應管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進行。 本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。
    4.擴增產物分析區:該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。 本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
    5.完備的實驗室配套設施:完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、生物安全柜、離心機、加樣器等。

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